特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱(chēng) | 白堊立克次氏體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Rickettsia gravesii | 貨號(hào) | YSP97141 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 谷胱甘肽過(guò)氧化酶8(GPX8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 噬幾丁質(zhì)菌屬 100mg Paralemmin 3蛋白(PALM3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 湖泊黃桿菌 500mg 絲聚蛋白2(FLG2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 側(cè)孢短小芽胞桿菌 1g 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白15(LCN15)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 少根根霉 250mg 防御素β132(DEFβ132)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 擬土黃紅菇 5g L-天冬氨酸脫氫酶(ASPDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 十字斯氏格孢 1g Clarin 2蛋白(CLRN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 美澳型核果褐腐病菌 25g 癌調(diào)蛋白2(OCM2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 蓖麻炭疽刺盤(pán)孢菌 5g 雙調(diào)蛋白B(AREGB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 漏斗狀側(cè)耳(鳳尾菇) 1g 封閉蛋白24(CLDN24)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 大腸埃希菌 250mg 脂肪酸轉(zhuǎn)移酶2(LIPT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 小環(huán)綿盤(pán)菌 5g RIO激酶2(RIOK2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 郝氏鏈霉菌 1g 分揀連接蛋白7(SNX7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 德?tīng)柌加墟呓湍浮?5g γ-谷氨?;D(zhuǎn)氨酶3(γGT3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 梨生囊殼孢菌 5g N-α-酰轉(zhuǎn)移酶16(NαA16)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 黑曲霉 1g 內(nèi)酰胺酶β2(LACTβ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 擬青霉 250mg 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶10(FUT10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 巨大芽胞桿菌 1g 外核苷酸焦酸酶/酸二酯酶4(ENPP4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黃色毛霉 250mg 白堊立克次氏體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒酸化動(dòng)力相關(guān)蛋白1抗體HMGA1 (high mobility group AT-hook 1) 高遷移率族蛋白A1抗原500 ul DNA連接酶4抗體HMGA2 (high mobility group A2) 高遷移率族蛋白A2抗原100 ul 二肽基肽酶6抗體HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原1 Pack 二氫葉酸還原酶抗體HO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1) 血紅素氧合酶-1/熱休克蛋白-32抗原1 Pack 有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體HO-2(Heme oxygenase 2) 血紅素氧合酶-2抗原100 ul 有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體phospho-HP1/herochromatin proin 1 (pTyr24)(fruit fly) 異染色質(zhì)蛋白1(酸化多肽)100 ul DOM3Z蛋白抗體phospho-herochromatin proin 1 (pTyr41)peptide 異染色質(zhì)蛋白1(酸化多肽)20 ul 蓬亂蛋白2抗體HPV16-E6/E6 proin(Human papillomavirus type 16) 類(lèi)頭狀瘤病毒16抗原3250 ul 酸化蓬亂蛋白2抗體HPV18 E6 類(lèi)頭狀瘤病毒18抗原650 ul |