特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 牡蠣包拉米蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bonamia ostreae | 貨號 | YSP96444 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 2'-脫氧胸苷-5'-一酸二鈉鹽β-Amyloid (1-42 Specific) (D3E10) Rabbit mAb*基(2-基氧)硅烷 衛(wèi)茅(>99%,分子生物學級)DNAJC2/MPP11 (D6B1E) Rabbit mAb三(五氟代基)硅烷 2-氯乙基膦酸(>90%,植物激素級)SignalSilence® Puma siRNA I*硫基硅烷 硝酸鐵九水PAX9 (D9F1N) Rabbit mAb2,3,*基戊烷 松三糖DyLight™ 350 Phalloidin2,3,*基戊烷 聚乙二20000Rab11FIP1 (D9D8P) Rabbit mAb基二氯硅烷 對甲磺酸鈉PathScan® Total Androgen Receptor Sandwich ELISA Kit基(氯甲基)二甲基硅烷 高酸鈉一水(>97%,BR)β2-microglobulin (D8P1H) Rabbit mAb*基炔硅烷 SPDP;N-琥珀酰亞-(2-吡啶二硫代)酸酯BAF Complex Antibody Sampler Kit*基-2-炔氧基硅烷 2-氨基噻唑(>98%,BR)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)基硫*基硅烷 氯化鈰七水MRP4/ABCC4 (D1Z3W) Rabbit mAb三基硅烷 D-阿拉伯糖(標準品)SMYD3 (D2Q4V) Rabbit mAb乙氧基-*基硅烷 D-阿拉伯糖Sin1 (D7G1A) Rabbit mAb*基疊氮化硅 三氯六氨絡鈷;六氨基氯化鈷Prostatic Acid Phosphatase (D3Y5P) Rabbit mAb*基硅烷化 米吐爾(>98%,BC)uPAR (D4Q5S) Rabbit mAb(*基硅烷)甲基氟代烷 鹽酸吡哆SimpleChIP® Human StAR Intron 1 Primers氨甲基*基硅烷 硅油Glycolysis II Antibody Sampler Kit1-甲基金剛烷 溴化鈉LGP2 (D3I3L) Rabbit mAb1-羥乙基金剛烷 牡蠣包拉米蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr861) 酸化粘著斑激酶抗體500 ul 甲狀腺激素受體β(THRb)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr576/577) 酸化粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr925) 酸化粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀腺非肽激素抗體(THAA)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr407) 酸化粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒phospho-FAK (Tyr577) 酸化粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒FAF1 Fas相關1因子抗體100 ul 甲狀旁腺激素1受體(PTH1R)ELISA試劑盒phospho-FAK (Ser732) 酸化粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)抗體ELISA試劑盒FAK2/Pyk2 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體20 ul 甲狀旁腺激素1-34(PTH 1-34)ELISA試劑盒phospho-Pyk2 (Tyr402) 酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗體500 ul |