樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 馬紅球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Rhodococcus equi | 貨號 | YSP97140 |
實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 分離蛋白3(SCRN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 粘質(zhì)沙雷氏菌 5g 信號素3G(SEMA3G)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 湖泊微桿菌 100g 脂酶D6(PLD6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 缺陷假單胞菌 25g Embigin蛋白(EMB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 新月彎孢 1g 核糖核酸外切酶2(ERI2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g 筑絲蛋白4(TEKT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 溶血隱秘桿菌 1g 皮質(zhì)素2(CTXN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 慢生根瘤菌 5g 皮質(zhì)素3(CTXN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 四川散斑殼 1g 防御素β133(DEFβ133)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 中國擬迷孔菌 250mg 葡糖酸激酶(GNTK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 波蘭青霉 50MG 烯醇化酶4(ENO4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 酮叢毛單胞菌 1g YY肽3(PYY3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 日本根霉 5g Ropporin 1B蛋白(ROPN1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 香菇 5MG 線粒體GTP酶1(MTG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 耐熱芽孢芽孢桿菌 25g 絲氨酸組合因子4(SERINC4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 異常畢赤酵母 5g 3-羥基丁酸脫氫酶2(BDH2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 100g 寡糖轉(zhuǎn)移酶4(OST4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 蠟狀芽孢桿菌 25g 失調(diào)蛋白8(ATXN8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 芽胞桿菌 500g 馬紅球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒DLX4抗體HDAC1/HD1(histone deacetylase 1) 組織蛋白去?;?抗原1 Kit DTX1抗體Flag-Tag (CT) Flag Tag標(biāo)簽多肽100 ul 絲裂原活化蛋白激酶酸酶-1抗體DYKDDDDK Tag(CT)/Flag-Tag 標(biāo)簽DYKDDDDK Tag分支肽100 ul 絲裂原活化蛋白激酶酸酶-2抗體T7 tag(recombinant T7-tagged proins) T7 tag標(biāo)簽抗原300 ul 細(xì)胞質(zhì)分裂付出蛋白1抗體V5 tag(recombinant V5-tagged proin) V5 tag多肽抗原100 ul 腦表皮生長因子跨膜蛋白DNER抗體KT3 tag KT3 tag標(biāo)簽抗原100 ul DUX3蛋白抗體VSV-G tag(vesicular stomatitis virus glycoproin) VSV-G tag標(biāo)簽抗原500 ul 死亡相關(guān)蛋白1抗體HLA-DR(human leukoy Antigen DR) HLA-DR抗原100 ul 軸絲動力蛋白重鏈9抗體HLA-E (Human Leukocy gen-E) 類白細(xì)胞抗原E100 ul |