PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 小孢子酒曲菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Rhizopus microspous | 貨號 | YSP97139 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 酸甘油酸變位酶5(PGAM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 揚奇青霉 1g 93kDa核孔蛋白(NUP93)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 里氏木霉 25g ATM交互子(ATMIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 香菇 5g Limkainβ1蛋白(LKAP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 嗜線蟲致病桿菌 25g Marapsin 2蛋白(MPN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 松口蘑 100g 視黃醇脫氫酶15(RDH15)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 人參土地桿菌 25g Penguin蛋白(PEN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 500g Misato同源物1(MSTO1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 地衣芽孢桿菌 1g 腈水解酶2(NIT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% Sphingomonas koreensis 5g 核仁蛋白58(NOP58)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 球孢白僵菌 1g 仙人掌素(Cactin)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 果生鏈核盤菌 1g 胰安肽(Aglycin)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 白僵菌 5g 血管緊張素1-7(Ang1-7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 孟氏假單胞菌 25g 透明質(zhì)酸氨基葡糖苷酶1(HYAL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% PL110 雜3(灰平) 5g RPE脊椎蛋白(RPESP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 環(huán)狀芽胞桿菌 25g Sarcosynapsin蛋白(SRYP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 猴頭 5g Shisa同源物5(SHISA5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 慢生根瘤菌 100g 分離蛋白2(SCRN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 羊毛狀青霉 25g 小孢子酒曲菌探針法熒光PCR檢測試劑盒異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗體HER2 receptor(NT)(erbB-2 isoform 2 receptor N-rminus) c-erbB-2受體抗體(N端)300 ul 結(jié)蛋白抗體HER2 receptor(NT)(erbB-2 isoform 2 receptor N-rminus) c-erbB-2受體抗原(N端)100µl DISC1 C端抗體HGF(hepatocy growth factor) 肝細(xì)胞生長因子抗原100 ul DISC1 N端抗體HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 類皰疹病毒8抗原100 ul 多能發(fā)育相關(guān)基因2抗體HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 類皰疹病毒8抗原100µl 結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體HHV8/ORF K2(Human herpesvirus 8 type P) 類皰疹病毒8抗原100 ul 多巴脫羧酶抗體HIF-1 Beta/ARNT1(Hypoxia-inducible factor-1 Beta) 缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗原500 ul 防御素β1/Defensin β1抗體HIF-2 Alpha (Hypoxia-inducible factor-2 Alpha) 缺氧誘導(dǎo)因子2α 抗原1 Kit 抗體Histone H1b(Histone H1.4) 組蛋白H1b抗原100 ul |