熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
吲哚(>98%,BR)Smad2/3 Antibody Sampler Kit2,5-二甲基-2,5-二(叔丁基過氧基)己烷

硫酸鋰(>98%,BR)Pan-Actin (D18C11) Rabbit mAb (HRP Conjuga)三羥甲基硝烷

硫柳汞鈉鹽LRIG1 Antibody三氟溴

硅粉(>99%，BR)K252a內(nèi)向-氨基-9-甲基-9-氮雜雙環(huán)[3,3,1]壬烷

油酸鈉(>98%,BR )SignalFire™ Eli ECL Reagent氯甲基*基硅烷

四甲基氯化銨(>99%,BR)SignalFire™ Eli ECL Reagent1-溴-氯-2-甲基烷

1-辛烷磺酸鈉(>98%,BC )Thapsigargin(S)-2-甲基-CBS-惡唑烷

2,3,5*酸(>97%,植物激素級)SMARCC2/BAF170 (D8O9V) Rabbit mAbS-(-)-1,2-環(huán)氧烷

吲哚丁酸(>98%,植物激素級)SHMT2 Antibody4,二異酸酯二環(huán)己烷

乙酸鈣一水(>98%,BR)SignalSilence® AUF1/hnRNP D siRNA I1,二溴-2,2-二甲氧基烷

酸三鈣(>98%,BR)PiT1/SLC20A1 (D1Z4X) Rabbit mAb二溴二氟

DL-硒代蛋氨酸(USP)RBBP5 (D4Y7R) Rabbit mAb1,2-二(二基膦基)乙烷

蜜二糖DMF (Dimethylformamide)二

草酸鈉(>98%，BC)Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb (PE Conjuga)二基氯

鎢酸鈉二水(>98%,BR)SimpleChIP® Human tRNA-Leu Anti-Codon (TAG) Primers兒茶酚烷

丁二酸酐(>98%,BR)S-Tag (D2K2V) XP® Rabbit mAb(S)-2-(氨甲基)-1-乙基吡咯烷

四乙基氯化銨(>98%,BR)Malachi Green Phospha Dection Kit1-乙氧基-1-*硅氧基環(huán)烷

吐溫60FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)(S)-氨基吡咯烷
皮炎芽生菌探針法熒光PCR檢測試劑盒結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒ET-1  內(nèi)皮素-1抗體100 ul

結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒ET-1  內(nèi)皮素-1單克隆抗體20 ul

結蛋白(DES)抗體ELISA試劑盒ET-1(whole serum)  內(nèi)皮素-1抗體（抗血清）100 ul

結蛋白(Des)ELISA試劑盒Ets1/ETS-1  Ets轉錄因子家族ets1抗體100 ul

角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒ETK/BMX  非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體100 ul

角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒Phospho-ETK (Tyr40)  酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體100 ul

膠轉蛋白(TAGLN)ELISA試劑盒Eukaryotic aspartyl proase(Rice)  天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體(水稻蛋白的一種)100 ul

膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒EV71 VP1  腸道病毒71型/手足口病病毒抗體100 ul

膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒EV71 VP1 (CT)  腸道病毒71型/手足口病病毒抗體(C端)100 ul