特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 吉氏巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Babesia gibsoni | 貨號 | YSP96406 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 大豆素,黃豆苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)C20H20O7芐氧基甲 大豆素,黃豆苷元C40H56氟-2-溴 D-別蘇氨酸C22H24ClFN4O3吡啶鹽 醋酸去氧皮質(zhì)酮 C19H22O61,1-二甲氧基環(huán)戊烷 醋酸去氧皮質(zhì)酮(標(biāo)準(zhǔn)品)C14H6O8溴-5-甲氧基甲酸 奧美沙坦酯 C20H20O46,8-二氯喹啉 奧美沙坦酯 C19H18O65-疏基-1-基-四氮唑 四氫生物蝶呤;沙蝶呤;(6R)-BH4C19H20O55-氨基四氮唑 安倍生坦C20H16O42,5-二氯肼鹽酸鹽 安倍生坦(標(biāo)準(zhǔn)品)C21H22O52,6-二氯肼鹽酸鹽 鹽酸決奈達(dá)隆C21H19NO42-甲基-氯 決奈達(dá)隆(標(biāo)準(zhǔn)品)C32H44O8氯甲酸環(huán)戊酯 雷諾C16H14O5溴-5-甲氧基吡啶 雷諾(標(biāo)準(zhǔn)品)C19H26O122-甲氧基-5-甲 樂卡地平鹽酸鹽C20H22O62,5-二氯甲酸 樂卡地平鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)C18H20O5甲氧基-甲酸 鹽酸異C20H28O4吲哚-6-甲酸甲酯 阿戈美拉?。↖I型)Description7-氯-1,2,3,四氫并[B]氮雜卓-5-酮 吉氏巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒Wnt-10b蛋白(WNT10B)ELISA試劑盒CNR-2/PCDHA 6 鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體100 ul V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)ELISA試劑盒CNTF 睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體100 ul T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒cofilin 絲切蛋白抗體100 ul T細(xì)胞表面糖蛋白CD3 epsilon鏈(CD3E/T3E)ELISA試劑盒Phospho-Cofilin (Ser3) 酸化絲切蛋白抗體100 ul T細(xì)胞白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)ELISA試劑盒COLEC12 凝集胎盤蛋白1抗體100 ul Toll樣受體7(TLR7)ELISA試劑盒Collagen I Ⅰ型膠原抗體20 ul Toll樣受體5(TLR-5)ELISA試劑盒Collagen II Ⅱ型膠原抗體5 mg TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒Collagen III 抗Ⅲ型膠原抗體100 ul Tau蛋白ELISA試劑盒Collagen III 抗Ⅲ型膠原抗體100 ul |