特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 扇革蜱通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Rhipicentor spp. | 貨號 | YSP97135 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 N-α-酰轉(zhuǎn)移酶30(NαA30)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 板栗蛇孢日規(guī)殼 25g Notchless蛋白(NLE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 苜蓿中華根瘤菌 500g Rho蛋白2(RHPN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 日本根霉 100ml 視黃醇脫氫酶13(RDH13)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 美味側(cè)耳(紫孢側(cè)耳) 25ml 視黃醇脫氫酶14(RDH14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 球孢白僵菌 500ml 腺苷酸激酶7(AK7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 金黃色葡萄球菌金黃亞種 1g 連接蛋白4(JPH4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% 白僵菌 250mg 核糖核酸酶A9(RNASE9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 紅曲霉 25g Anoctamin 9蛋白(ANO9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 大腸埃希菌 5g N-去酰化酶/磺基轉(zhuǎn)移酶4(NDST4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 亞細(xì)亞菌屬 1g Clarin 3蛋白(CLRN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 5g 轉(zhuǎn)位因子蛋白2(TSPO2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 杏鮑菇 1g 半椎蛋白2(HMCN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 膠孢 5g Akirin 2蛋白(AKIRIN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 非無菌藥品 金黃色葡萄球菌(陽性) 25g 親核素α7(KPNα7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% Flavobacterium 5g 泛核蛋白2(UBN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 微紅微球菌 25g 鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4(SGLT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 根瘤菌屬 5g 肌腱蛋白N(TNN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 糞產(chǎn)堿菌糞亞種 100g 扇革蜱通用探針法熒光PCR檢測試劑盒DNA酶1樣蛋白1抗體GPA33(glycoproin A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原500 ul 抗菌蛋白DCD抗體glypican 1 脂?;嫉鞍拙厶?1抗原1 Kit 肌動蛋白解聚因子抗體GPC3(glypican 3; Instinal proin OCI-5; GTR2-2; MXR7) 脂?;嫉鞍拙厶?3(多肽)100 ul 甘油二酯?;D(zhuǎn)移酶2抗體Glypican 4(Glypican prooglycan 4) 脂?;嫉鞍拙厶?4抗原100 ul DHX15蛋白抗體GRB2/ASH peptide 生長因子受體結(jié)合蛋白2抗原300 ul DIAPH2蛋白抗體GZMB/CCPI(Granzyme B) 顆粒酶B抗原100 ul 酸化蓬亂蛋白2抗體UTS2R/GPR14(Uronsin II receptor:G Proin Coupled Receptor 14) G蛋白偶聯(lián)受體14抗原100 ul Wnt通路抑制因子2抗體GPR30(G Proin Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯(lián)受體30抗原300 ul 酸化B淋巴細(xì)胞銜接分子DAPP1抗體GnRHR peptide 促性腺激素釋放激素受體抗原100 ul |