熒光染料的優(yōu)點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產品名稱 | 馬鼻肺炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV) | 貨號 | YSP96696 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 5-溴嘧啶ORC1 (7A7) Rat mAb3,5-二溴 2,5-二甲氧 Phospho-Rpb1 CTD (Ser2/5) Antibody3,5-二氯 3,5-二甲氧 ORC2 (3G6) Rat mAb2-氯-肼 溴-1- ORC6 (3A4) Rat mAb(S)-芐基-2-唑烷酮 阿螺旋霉素ARP3 Antibody氨基-2-甲氨基-6-甲氧基吡啶 1,二溴-5-氯 ARP3 Antibody4,4'-二(N,N-二甲氨基)二甲酮 3,5-二溴甲Max (S20) Antibody二甲 1-溴-2,二甲氧基 Glucocorticoid Receptor (D4X9S) Mouse mAbBOC-D-氨酸甲酯 三溴乙酸SAP102 (A7R8L) Rabbit mAb氯-氟磺酰氯 粘溴酸 RKIP AntibodyN-叔丁氧羰基基環(huán)丁 大豆異黃酮CD19 (SJ25C1) Mouse mAb (PerCP Conjuga)Boc-氨甲基氮雜環(huán)丁烷 5-溴吲哚 CD15/SSEA1 (MC480) Mouse mAb羧基-氯酸 甲氧基甲酸TRA-1-81 (TRA-1-81) Mouse mAb氟-羥基基酸 依魯替尼(PCI32765)TRA-1-60(S) (TRA-1-60(S)) Mouse mAbN-基鄰氨基甲酸 右旋蘭索拉唑(標準品)TRA-1-60(S) (TRA-1-60(S)) Mouse mAb2-甲基-氨基-5-溴吡啶 右旋蘭索拉唑TRA-2-54 (2J) Mouse mAb7-二乙氨基-甲基 樂伐替尼Tollip Antibody吲哚-2,二酮 PR171關鍵中間體I Ingrin Antibody Sampler Kit2-甲基萘 馬鼻肺炎病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒魚白三B4(LTB4)ELISA試劑盒AQP1/FITC 熒光素標記水通道蛋白-1抗體IgG100 ul 魚白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒AQP-2/FITC 熒光素標記水通道蛋白-2蛋白抗體IgG100 ul 魚白介素6(IL-6)ELISA試劑盒AQP-3/FITC 熒光素標記水通道蛋白-3抗體IgG100 ul 魚白介素4(IL-4)ELISA試劑盒AQP4/FITC 熒光素標記水通道蛋白-4蛋白抗體IgG20 ul 魚白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒AQP5/FITC 熒光素標記水通道蛋白-5抗體IgG100 ul 魚白介素12(IL-12)ELISA試劑盒AQP7/FITC 熒光素標記水通道蛋白-7抗體IgG100 ul 魚白介素10(IL-10)ELISA試劑盒AQP9/FITC 熒光素標記水通道蛋白-9抗體IgG500 ul 魚γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒AR/FITC 熒光素標記雄激素受體抗體IgG100 ul 魚CD8分子(CD8)ELISA試劑盒AKR1B1/ADR/FITC 熒光素標記糖還原酶抗體IgG100µl PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |