PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
羧酸酯酶1(CES1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黑曲霉　5g

嘌呤能受體P2X7(P2RX7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　金黃殼囊孢菌　25g

酪氨酸3/色氨酸5單加氧酶激活蛋白ζ(YWHAζ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　大腸埃希氏桿菌　5g

Ⅻ型膠原(COL12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　棒曲霉　25g

脂酰肌醇特異性酯酶Cγ2(PLCγ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　伯頓畢赤酵母　5g

Ki-67蛋白(Ki67P)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　托魯斯山鏈霉菌　1g

雙特異性酸酶5(DUSP5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　巨大芽孢桿菌　25g

鈣結(jié)合蛋白(CALB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　擬粉紅鎖擲孢酵母　5g

雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　金色鏈霉菌　1g

神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑(NSP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　褶緣黑點(diǎn)口蘑　5g

70kDa熱休克蛋白結(jié)合蛋白1(HSPBP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　擬青霉　1g

多型性腺瘤基因樣蛋白1(PLAGL1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　釀酒酵母　25g

雙特異性酸酶1(DUSP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　苛求芽孢桿菌　5g

網(wǎng)鈣蛋白2(RCN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　長(zhǎng)柄鏈格孢　1g

電子傳遞黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　冷溫木拉克酵母　5g

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　泗川假黃單胞菌　1g

細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　枯草芽孢桿菌　5g

絲氨酸肽酶抑制因子Kazal型5(SPINK5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌　1g
豬圓環(huán)病毒2型探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒酸化著絲粒蛋白AAQP5(aquaporin Proin-5)  水通道蛋白-5抗原100 ul

酸化二氫嘧啶酶樣2抗體IRS P53 (Insulin receptor substra P53)(多肽)  1 Kit

克拉拉細(xì)胞蛋白抗體Ingrin Beta chain (ITG- Beta3/ITGB3)  整合素-β3（抗原）100 ul

B淋巴細(xì)胞粘附分子CD22抗體AQP9(aquaporin Proin-9)  水通道蛋白-9抗原 (多肽抗原)100 ul

組織蛋白酶G抗體Leptin  瘦素（多肽抗原）100 ul

刺激分子B7-1蛋白抗體Leptin receptor(long)  瘦素受體（長(zhǎng)）（抗原）100 ul

1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框145抗體phospho-AR/androgen receptor( p-Ser580)peptide  雄激素受體（多肽）1 Kit

20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框186抗體MAPK-1/2  絲裂原活化蛋白激酶（抗原）100 ul

細(xì)胞角蛋白7抗體MAPKK2  絲裂原活化蛋白激酶激酶100 ul