熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬爾太蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Marteilia spp. | 貨號(hào) | YSP96912 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 三丁酸甘油酯(>98.0%(GC))異基三氟酸 三甘二酸酯(>98.0%(GC))氟-1,2-二甲氧基 O-?;吐樗峒柞?>80.0%(GC))5-基噻吩-2-酸 檸檬酸三酯(>99.0%(GC))N-?;?哌啶酮 檸檬酸*酯(>98.0%(GC))一溴三氟烷 檸檬酸三酯(>97.0%(T))N-(噻吩基)酰 N-丁基磺酰(>98.0%(HPLC)(N))芐氧基-1-丁 D-(+)-樟腦(>98.0%(GC))氟酮 N-磺酰(鄰-,對(duì)-位的混合物)(>98.0%(N))5-硝基煙酸 2-硝基聯(lián)(>98.0%(GC))2-溴-1-烷 阿卡波糖十三醋酸酯溴-1-甲基-1H-咪唑 阿昔洛韋鈉鹽(溴甲酰)酸酯 阿昔洛韋單酸鹽6-?;?1,并二氧雜環(huán) 阿昔洛韋-d4溴化鎂溶液 N2-?;?9-(2-酰氧基氧基)鳥嘌呤(阿昔洛韋雜質(zhì))3,(亞甲二氧)肉桂酸 腺苷3′,5′-環(huán)單硫代酸酯,8--,Rp-異構(gòu)體鈉鹽N,N-二甲基-2,2-二甲氧基酰 L-腺苷溴- 1 -甲基- 2 -(甲磺?;? 腺苷-2'-單酸鹽氟甲酸酐 馬爾太蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒20號(hào)染色體開放閱讀框165抗體Phospho-Numb (Ser276)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化膜相關(guān)蛋白Numb抗體IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框166抗體NOS-3/eNOS /FITC 熒光素標(biāo)記一氧化氮合成酶-3抗體(內(nèi)皮型)IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框173抗體Phospho-eNOS (Thr495)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框24抗體Phospho-eNOS (Ser1177) /FITC 熒光素標(biāo)記酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框30抗體Phospho-eNOS (Ser113)/FITC 熒光素標(biāo)記酸化一氧化氮合成酶3抗體(內(nèi)皮型)IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框4抗體Notch1/MOTC /FITC 熒光素標(biāo)記跨膜受體蛋白Notch-1抗體IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框7抗體Notch3/FITC 熒光素標(biāo)記跨膜受體蛋白Notch-3抗體IgG1 Kit 20號(hào)染色體開放閱讀框79抗體Nox-4/NADH /FITC 熒光素標(biāo)記NADPH氧化酶4抗體IgG100 ul 20號(hào)染色體開放閱讀框94抗體NPPC/FITC 熒光素標(biāo)記促尿鈉排泄肽前體C抗體IgG100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |