微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：產(chǎn)氣腸桿菌
貨號(hào)：YS-01J13504
拉丁文: Enterobacter aerogenes

提供形式: 凍干物

安全等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: Microscan質(zhì)控菌株。

培養(yǎng)基: 營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產(chǎn)生芽孢。121℃，15min。

生長(zhǎng)條件: 37℃，好氧

存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

兔可溶性腫瘤壞死因子-1(sTNF-1)螺[1,3,3-基吲哚-(8'-甲氧基苯并二氫吡喃)][光致變色化合物](>98.0%(T))ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體

兔抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)  1,3,基吲哚-β-萘基二[光致變色化合物](>98.0%(T))鳥嘌呤核苷酸交換因子rasgef1a抗體

兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40) 1,3,3-基吲哚-奈諤(>98.0%(HPLC)(T))胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白R(shí)LLM1抗體

兔銅藍(lán)蛋白(CP)1,1'-雙(2,4-二基)-4,4'-二氯化聯(lián)吡啶(>97.0%(HPLC))環(huán)指蛋白45/自分泌運(yùn)動(dòng)因子受體抗體

兔黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)1,1'-二甲基-4,4'-聯(lián)吡啶鎓鹽二氯化物水合物(>98.0%(HPLC)(T))維甲酸相關(guān)孤兒受體α抗體

兔彈性蛋白酶3B(ELA3B)  1,1'-二庚基-4,4'-二溴化聯(lián)吡啶鎓(>98.0%(HPLC)(T))維甲酸相關(guān)孤兒受體γ抗體

兔生長(zhǎng)分化因子7(GDF7)1,1'-二正辛基-4,4'-聯(lián)二溴化吡啶嗡(>98.0%(T))癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab4A抗體

兔甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶2(MASP2)1,1'-二芐基-4,4'-聯(lián)吡啶鎓鹽二氯化物水合物(>98.0%(HPLC))ATP調(diào)節(jié)離子通道ROM K抗體

兔基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP-8)1,1'-二苯基-4,4'-二氯化聯(lián)吡啶鎓(>97.0%(HPLC)(T))ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab24抗體

兔組織蛋白酶L(CTSL)  1,1'-二甲基-4,4'-二氯化聯(lián)吡啶鎓(>98.0%(HPLC)(T))視黃脫氫酶10抗體

兔基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP-11)3,3-二苯基-3H-萘并[2,1-b]吡喃(>98.0%(HPLC))Ras蛋白腦組織同源類似物RHEB蛋白抗體

兔接頭蛋白2(ELMO2)2,5-降二烯(含穩(wěn)定劑BHT)(>97.0%(GC))原癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AP2B抗體

兔縮酶(ALD) 硫靛紅視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白5抗體

兔碳酸酐酶VI(CA6)苯甲酸膽固酯(>96.0%(GC))Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體

兔硫氧化還原蛋白(Trx)亞油酸膽固酯(>95.0%(T))核糖核苷酸還原酶亞基R2抗體

兔磷脂爬行酶1(PLSCR1)棕櫚酸膽固酯(>97.0%(T))Runx3抗體
產(chǎn)氣腸桿菌說(shuō)明書短波單胞菌屬原鈣粘蛋白β4抗體

小單孢菌原鈣粘蛋白γ10抗體

谷氨酸棒桿菌原鈣粘蛋白γA4抗體

里亞氏須腹菌原鈣粘蛋白γA2抗體

短小芽孢桿菌原鈣粘蛋白γA5抗體

蠟狀芽孢桿菌原鈣粘蛋白γA7抗體

黑曲霉原鈣粘蛋白γA8抗體

奇異硬皮馬勃原鈣粘蛋白γA9抗體