特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 牛皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Hepervirus 1 (BHV-1)1 | 貨號 | YSP96462 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 9-氨基吖啶單鹽酸單水合物(>98%,BS)NRMT (D9D6P) Rabbit mAb4,4'-(六氟異)二酞酸酐 9-咔唑乙(>95%,BR)Lamin B1 (D9V6H) Rabbit mAb葡萄糖酸亞鐵鹽 乙酰基乙酰(>99%,BR)EXPAND1/MUM1 (D1Z6Y) Rabbit mAb-酚 溴化乙酰膽(>98%,BR)Ubiquityl-PCNA (Lys164) (D5C7P) Rabbit mAb2,二氯-5-乙基嘧啶 酮肟(>98%,BR)BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb2-羥基-6-甲酸 化乙酰膽(>98%,BR)Phospho-4E-BP1 (Ser65) (D9G1Q) Rabbit mAb氯-嗎啉基-1,2,5-噻二唑 酸性藍29(>50%,Ind Grade)Securin (D2B6O) Rabbit mAb2-溴-硝基-1-(三氟甲氧基) 酸性藍40(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb甲滅酸(甲芬那酸) 酸性品紅6B(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb4,6-二氨基-2-甲基巰基嘧啶 吖啶鹽酸鹽(>98%,BS)DNMT3L (E1Y7Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)氯-2-吡啶羧酸甲酯 1-金剛烷甲酸(>99%,BR)HYOU1 Antibody1-辛基-2,二甲基咪唑氯鹽 B1(>98%,BR)Lmx1B (D1E2) Rabbit mAb2-[2-(甲氧基)乙]酚 B2(>98%,BR)CHD1L (E1I8C) Rabbit mAb亞甲基環(huán)丁 G1(>98%,BR)Phospho-Akt1 (Ser129) (D4P7F) Rabbit mAb噁唑羧酸乙酯 G2(>98%,BR)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)4,4'-二氨基二乙-2,2'-二磺酸 茜素黃R鈉鹽XPF (D3G8C) Rabbit mAb基-甲酸甲酯 D-阿洛糖(>98%,BR)Sec31A (D1G7I) Rabbit mAb2-羥基-5--三氟甲基吡啶 α-葡萄糖縮氯(>98%,BR)Atg13 (E1Y9V) Rabbit mAb對二甲氨基甲酸異戊酯 牛皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)ELISA試劑盒GLI1 下游轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白抗體100 ul 骨保護素(OPG)ELISA試劑盒GLP-1 (7-36) 胰高血糖素樣肽-1抗體100 ul 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶pi基因(GSTpi)ELISA試劑盒GLP-1 胰高血糖素樣肽-1抗體100 ul 谷胱甘肽還原酶(GR)ELISA試劑盒GLP-1/KG-31 GLP-1單克隆抗體100 ul 谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒GLP-1R 胰高血糖素樣肽-1受體抗體100 ul 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶TT(GSTπ)ELISA試劑盒GLP-2 胰高血糖素樣肽-2抗體100 ul 谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒GLP-2 胰高血糖素樣肽-2抗體100 ul 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶6抗體(IgM)ELISA試劑盒GLUT1 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1抗體20 ul 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶2抗體(IgG)ELISA試劑盒GLUT2 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2抗體100 ul |