熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 蛙病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Ranavirus | 貨號 | YSP97132 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 水通道蛋白12B(AQP12B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 單增李斯特氏菌 250mg ATP合酶6(ATP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 100g NADH脫氫酶1(ND1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 果生鏈核盤菌 25g 細胞色素b(COB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 美澳型核果褐腐病菌 500g 信號素4B(SEMA4B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 凝結(jié)芽胞桿菌 5g 半胱氨酸蛋白酶抑制劑9(CST9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 短小芽孢桿菌 100g 外核苷酸焦酸酶/酸二酯酶5(ENPP5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 草色串孢 25g 魚精蛋白3(PRM3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 多座蟲草* 5g 神經(jīng)肽VF(NPVF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑木耳 100g 絲氨酸蛋白酶肽酶抑制因子B支成員11(SERPINB11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 1g 鈣黏蛋白24(CDH24)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 地下節(jié)桿菌 25g 腦啡肽酶2(NEP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 解淀粉芽孢桿菌 5g 分揀連接蛋白10(SNX10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 枯草芽孢桿菌 100g 分揀連接蛋白14(SNX14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 25g 分揀連接蛋白16(SNX16)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 小鏈霉菌 500g 矢車菊苷β6(CENTβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 繩生毛殼 1g 白介素1θ(IL1θ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g 紋蛋白3(STRN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑木耳(186) 5g 蛙病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒DCN1樣蛋白2抗體FOXM1/HFH 11 peptide 插頭蛋白M1抗原1 Kit 熱休克蛋白J2抗體Measles virus of fusion proin 麻疹病毒抗原(麻疹病毒融合蛋白)100 ul 雙特異性酪氨酸酸化調(diào)節(jié)激酶1B抗體FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor) 促卵泡刺激素受體抗原100 ul 二?;视图っ?抗體FSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原100 ul DNA依賴蛋白激酶催化亞基抗體GABRA1(gamma-aminobutyric acid (GABA) A receptor, alpha 1) γ1氨基丁酸A型受體α1抗原100 ul 雙同源框蛋白4抗體GABAB1(GABAb Receptor 1) g-氨基丁酸B1受體(多肽)500 ul 無精癥缺失基因1抗體GABABR2/GB2(GABA B Receptor 2) γ1氨基丁酸A型受體B2抗原100µg 酸化細胞周期檢測點激酶2抗體GAD-67 (glutama decarboxylase 67) 谷氨酸脫羧酶-67抗原100 ul 通道蛋白DRK1抗體GADD153(Growth arrest and DNA damage-inducible 153) 生長抑制DNA損傷基因153抗原100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |