樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測(cè) 1)紫外吸收法測(cè)定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋?zhuān)?:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測(cè)定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱(chēng) | 人支原體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Mycoplasma hominis | 貨號(hào) | YSP96976 |
實(shí)驗(yàn)過(guò)程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè) 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實(shí)用新型技術(shù)公開(kāi)了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過(guò)將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過(guò)側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。 客戶(hù)只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱(chēng)即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 Anti-APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml EMC1 英文名稱(chēng): 腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體 0.1ml 鋅指脂蛋白-1a抗體 Anti-ZNF268 - N-terminal Anti-ZNF268 - N-terminal 0.1ml Anti-Tubb3/FITC 熒光素標(biāo)記β微管蛋白-Ⅲ抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh phospho-IKBKE(Thr501) 酸化核因子κB抑制蛋白E抗體 規(guī)格 0.1ml TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 促甲狀腺素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg 人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒英文名稱(chēng):Human Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Ki進(jìn)口/分裝 C12ORF49 英文名稱(chēng): 12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體 0.2ml Anti-Phospho-Insulin Receptor Beta (Tyr1361) 酸化胰島素受體β抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml CEA/CD66(Human carcinoembryonic antign) ELISA Kit 人癌胚抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-HOXA10 HOXA10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh MCM2 染色體維持缺陷蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人絲酸/蘇酸蛋白酸酶 96T RASSF6 英文名稱(chēng): RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2mlpentamethoxyflavone20mgHPLC≥98% 異莪術(shù)烯醇Isocurcumenol24063-71-620mgHPLC≥98% 異佛手柑內(nèi)酯Isobergapten482-48-420mgHPLC≥98% 異甘草苷;異甘草甙Isoliquiritoside5041-81-620mgHPLC≥98% 異甘草素Isoliquiritigenin961-29-520mgHPLC≥98% 異鉤藤堿Isorhynchophylline181124320mgHPLC≥98% 異葒草苷;異葒草素Isoorientin4261-42-120mgHPLC≥98% 異槲皮苷;異槲皮素;羅布麻甲素,槲皮素-3-葡萄糖甙Isoquercitrin21637-25-220mgHPLC≥98% 異虎耳草素;異茴芹內(nèi)酯,茴芹素,異茴芹素Isopimpinellin482-27-920mgHPLC≥98% 異苦參酮IsokurarinoneHPLC≥98% 大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒 進(jìn)口?隆抗體Bcl-2 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 人支原體探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒羧酸酯酶6抗體Fut4/CD15/SSEA-1 /FITC 熒光素標(biāo)記階段特異性胚胎表面抗原-1抗體IgG20 ul Cezanne蛋白抗體SSEA3/FITC 熒光素標(biāo)記階段特異性胚胎表面抗原-3抗體IgG100 ul 內(nèi)臟移位線(xiàn)管蛋白CFC1蛋白抗體SSEA4/FITC 熒光素標(biāo)記階段特異性胚胎表面抗原-4IgG20 ul 補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白2抗體AKAP12/FITC 熒光素標(biāo)記絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體IgG100 ul 補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白4抗體SSTR1/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體1(SSTR1)抗體IgG500 ul 補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白5抗體SSTR2 /FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體2(SSTR2)抗體IgG100 ul 7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28A抗體SSTR3/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體3(SSTR3)抗體IgG10 ug CpG結(jié)合蛋白抗體SSTR5/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體5(SSTR5)抗體IgG10 ug CGG結(jié)合蛋白1抗體SSTR4/FITC 熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑素受體4(SSTR4)抗體IgG100 ul |