PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
松蘿酸；D-地衣酸ABIN-1 Antibody氯-基酸

茴香霉素Phospho-p73 (Tyr99) Antibody2-羥酸

二氟酸鈉WRN (8H3) Mouse mAb羥酸

甘氨鵝脫氧膽酸鈉WRN (8H3) Mouse mAb甲?；?/span>

BGJ398(NVP-BGJ398)p53 (7F5) Rabbit mAb (Biotinylad)甲?；?/span>

BMN-673Caspase-5 (D3G4W) Rabbit mAb羥基酸

星孢菌素Tau (D1M9X) XP® Rabbit mAb5-氟-吡啶酸

唑西林鈉Tau (D1M9X) XP® Rabbit mAb2-氨基甲酸乙酯

唑西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb羥乙基咪唑

維E煙酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (81E11) Rabbit mAb2-氨基-3,5-二氯吡

偶氮CD4 (RPA-T4) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)羥基

(R)-1-氨基-甲基丁基酸蒎烷二酯鹽酸鹽 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers溴化鎂

熒光素-5-馬來酰亞TWIST1 Antibody氨基-2,6-二羥基嘧啶

Veliparib (ABT-888)Loading Control Antibody Sampler Kit (HRP Conjuga)酞

萘夫西林鈉Phospho-SAPK/JNK (Thr183/Tyr185) (98F2) Rabbit mAb5-羧基-2-氟酸

萘夫西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)JNK2 Antibody6-氯嘌呤

阿托西班,醋酸阿托西班NRF1 (D9K6P) Rabbit mAb2,二氯甲

曲格列汀β-Arrestin 1/2 (D24H9) Rabbit mAb反式石竹
馬皰疹病毒3型探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒魚熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒AMPK Beta1/FITC  熒光素標(biāo)記腺苷單酸活化蛋白激酶β1抗體IgG100 ul

魚熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒Amylin/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體IgG100 ul

魚去甲腎上腺素(NE)ELISA試劑盒Ang- II /FITC  熒光素標(biāo)記血管緊張素II抗體IgG100 ul

魚E2(PGE2)ELISA試劑盒ANG-2/FITC  熒光素標(biāo)記血管生成素-2抗體IgG100 ul

魚葡萄糖激酶(GCK)ELISA試劑盒Ankyrin G/ANK-3/ankyrin 3/FITC  熒光素標(biāo)記錨定蛋白G抗體IgG100 ul

魚葡萄糖-6-酸酶(G6PC)ELISA試劑盒ANGPTL1/ANG-1 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗體IgG100 ul

魚皮質(zhì)(Cortisol)ELISA試劑盒ANGPTL2/ANG-2 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣2/血管生成素樣蛋白-2抗體IgG100 ul

魚內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒ANGPTL4/ANG-4 /FITC  熒光素標(biāo)記血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體IgG100 ul

魚免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒Annexin I/FITC  熒光素標(biāo)記、大、膜粘連蛋白 I抗體IgG100 ul