客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
石蠟切片組織AKT蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒　GAMT A Kit　100 ul

載玻片細胞AKT蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GALNTL2 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片組織AKT蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GALNTL5 ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織AKT蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GAN ELISA Kit　100 ul

細胞AKT蛋白表達比色法定量檢測試劑盒　GAL3ST4 ELISA Kit　100 ul

細胞AKT蛋白表達熒光定量檢測試劑盒　GALE ELISA Kit　100 ul

AKT蛋白表達西方雜交分析試劑盒　GALK1(Galactokinase) ELISA Kit　400 ul

AKT蛋白免疫共沉淀分析試劑盒　GAPDHS ELISA Kit　100 ul

AKT蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒　GALNT14 ELISA Kit　300 ul

細胞P38蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒　GALK2 ELISA Kit　10 mg

載玻片細胞P38蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒　GALNT4 ELISA Kit　100 ul

冰凍切片組織P38蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒　GALM ELISA Kit　20 ul

石蠟切片組織P38蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒　GADD34 ELISA Kit　100 ul

載玻片細胞P38蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GABRG2 ELISA Kit　400 ul

冰凍切片組織P38蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GADD45A ELISA Kit　100 ul

石蠟切片組織P38蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒　GADD45GIP1 ELISA Kit　100 ul
齒垢密螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒谷氨酰6-酸果糖轉移酶抗體M-CSF(Human Macrophage Colony-Stimulating Factor) ELISA kit  巨噬細胞集落刺激因子200 ul

谷胱甘肽S轉移酶θ抗體MIC-1 human ELISA kit  巨噬細胞抑制因子-1 ELISA 試劑盒600 ul

谷胱甘肽S轉移酶θ2抗體MCP-3/CCL7(Human monocy chemotactic proin 3) ELISA kit  單核細胞趨化蛋白3200 ul

γ-谷氨酰轉肽酶6抗體MCP-2/CCL8(Human monocy chemotactic proin 2) ELISA kit  單核細胞趨化蛋白2150 ul

顆粒酶A抗體MCP-1/CCL2/MCAF(Human monocy chemotactic proin 1/monocy chemotactic and activating factor) ELISA kit  單核細胞趨化蛋白1600 ul

顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體Human L-Selectin ELISA kit   L選擇素200 ul

粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體IL-9(Human Inrleukin 9) ELISA KIT  白介素9300 ul

血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體IL-8/CXCL8(Human Inrleukin 8) ELISA KIT  白介素8100 ul

G蛋白修補結構域蛋白3抗體IL-6(Human Inrleukin 6) ELISA KIT  白介素6100 ul
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。