熒光定量PCR試劑盒技術：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 溶血性曼氏桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mannheimia haemolytica | 貨號 | YSP96903 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
吡(>98.0%(GC))(10-基蒽-9-基)酸 2,吡二羧酸(>98.0%(HPLC)(T))2-溴-9,10-雙(2-萘基)蒽 2,6-吡啶二羧酸(>98.0%(GC)(T))9-溴-10-(2-萘基)蒽 吖(>98.0%(GC))9,9'-聯(lián)蒽 2,4,6-三(吡啶基)-1,3,5-三(升華精制品)(>97.0%(N))N,N'-二基聯(lián)二 茴香偶酰(>98.0%(GC))N,N'-二(1-萘基)-4,4'-聯(lián)二 偶酰(>99.0%(GC))N,N'-二對甲基聯(lián) 2-甲酰甲酸(>99.0%(T))二(溴基) 偶酰 (區(qū)域精制法精制,熔段數(shù):22)NBPHEN 安息香甲基(>98.0%(GC))3,3'-[5'-[(吡啶基)基][1,1':3',1''-三聯(lián)]-3,3''-二基]二吡啶 安息香異(>99.0%(GC))4,4',4''-三(咔唑-9-基)三 安息香異丁基(>95.0%(GC))4,4'-二(9-咔唑)聯(lián) 甲酰甲酸(>98.0%(T))26DCZPPY 2-甲酰甲酸甲酯(>98.0%(GC))26DCZPPY 2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基基丁酮(>98.0%(HPLC)(T))三(2-基吡啶)合銥 2,2-二氧基酮(>95.0%(GC))酰酮酸二(2-基吡啶)銥 2,2-二甲氧基-2-基酮(>98.0%(GC))IR(2-PHQ)2(ACAC) 2,二基硫雜蒽-9-酮(>90.0%(GC))4,4'-雙(9-基-咔唑基)-1,1'-聯(lián)
溶血性曼氏桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒19號染色體開放閱讀框2抗體NDRG4/FITC 熒光素標記抑癌基因NDRG4抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白62抗體Nebulin/FITC 熒光素標記伴肌動蛋白抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結構域蛋白64抗體NEP/FITC 熒光素標記腦啡肽酶抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白72抗體Nephrin Proin/FITC 熒光素標記去氧腎上腺素抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白73抗體Ephrin B/FITC 熒光素標記兔抗、大、Ephrin B抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結構域蛋白74B抗體Ephrin B (phospho Tyr331) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Ephrin B抗體IgG100 ul 19號染色體開放閱讀框25抗體Ephrin B (phospho Tyr298) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Ephrin B抗體IgG20 ul 19號染色體開放閱讀框42抗體Ephrin B (phospho Tyr324/329) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Ephrin B抗體IgG100 ul 19號染色體開放閱讀框44抗體Ephrin B (phospho Tyr317) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Ephrin B抗體IgG100 ul |
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