微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：季也蒙念珠菌
貨號(hào)：YS-01J13304
拉丁文: Meyerozyma guilliermondii

分離基物: 人的痰

提供形式: 凍干粉

安全等級(jí): 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株。產(chǎn)生核黃素；API產(chǎn)品質(zhì)量控制菌株。

培養(yǎng)基: YPD培養(yǎng)基

生長(zhǎng)條件: 30℃

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開(kāi)的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高，營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng)，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多，有些可添加保護(hù)劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜，對(duì)平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

Cortactin  皮層肌動(dòng)蛋白抗體相關(guān)抗原5(多肽抗原)

Coronin 3  冠蛋白3抗體肺表面活性蛋白A(抗原)

Coronin 1a  肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白CORO1A抗體滑膜凋亡抑制物1（抗體）

Corin  心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體非受體型酪氨酸激酶(抗原)

COPS8  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基8抗體微管相關(guān)蛋白（抗原）

COPS7A  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體CD90

COPS6  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體硫酯包含蛋白-1(抗原)

COPS4  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基4抗體P53誘導(dǎo)糖酵解和凋亡調(diào)節(jié)因子蛋白（抗原）

COPS2/TRIP15  甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體金屬蛋白酶組織抑制因子-4(抗原)

Contactin-1  神經(jīng)表面蛋白F3甲狀腺過(guò)氧化物酶(抗原)

Contactin 6/NB3/CNTN6  神經(jīng)NB3特定蛋白抗體促甲狀腺素受體（抗原）

Contactin 3  腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體淋巴生成素-1（抗原）

Connexin-45  間隙連接蛋白45抗體甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2(抗原)

Connexin-40  間隙連接蛋白40抗體酪氨酸酶(多肽抗原)

Connexin-37/GJA4  間隙連接蛋白37抗體尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1 (抗原)
季也蒙念珠菌說(shuō)明書(shū)產(chǎn)氨短桿菌心血管發(fā)育中胚層相關(guān)蛋白1抗體 N-6-(δ2-Isopentenyl)-adenine 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml;溶劑：1.5mol/L硝酸

孟氏假單胞菌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2抗體 9-(2',3',5'-Tri-O-benzyl-β-D-arabinofuranosyl)adenine 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,介質(zhì)：0.05mol/L NaOH

球形副球菌MYC結(jié)合蛋白2抗體 EHNA hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

空腸彎曲桿菌精氨酸/脯氨酸富含卷曲蛋白1抗體 2-Fluoroadenine 質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,基體:1%HNO3

弗氏鏈霉菌微管相關(guān)蛋白9抗體 Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate sodium salt 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCL

釀酒酵母有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣1抗體 Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate sodium salt 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

產(chǎn)亞硝酸鹽馬杜拉放線菌髓過(guò)氧化物酶抗中性粒胞質(zhì)IgG抗體 Nicotinic acid adenine dinucleotide sodium salt 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

雜色曲霉兔抗小鼠IgA抗體 α-Nicotinamide adenine dinucleotide 質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL,基體: 10%HCl