熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
(-)-丁香樹脂酚-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷（標準品）乙二

柯里拉京（標準品）2-炔-1-

人參皂苷F3（標準品）乙二

槐定（標準品）乙二

去甲澤拉木（標準品）四氫噻喃-酮

鹽酸去氫駱駝蓬（標準品）鄰溴氟

巖大戟內(nèi)酯B（標準品）2-氨基-5-氯吡啶

路路通內(nèi)酯（標準品）乙肟

甘油三油酸酯（標準品）氯甲

長春花（標準品）間溴氟

長春花甲酸甲酯

脫水長春（標準品）2-羥基茴香硫

長春新（標準品）對氯肼鹽酸鹽

硫酸金雀花；硫酸司巴?。藴势罚€基甲酸

高烏甲素（標準品）六甲基二硅氧烷

番茄紅素（標準品）酞酰亞

苔黑酚葡萄糖苷；地衣二葡萄糖苷（標準品）吲哚甲

短葶山麥冬皂苷C（標準品）酸叔丁酯
嗉囊食通蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化鐵蛋白Fe65抗體CT-1/CTF1/FITC  熒光素標記心肌營養(yǎng)素1抗體IgG300 ul

酸化鐵蛋白Fe65抗體CT-R/FITC  熒光素標記降鈣素受體抗體IgG100 ul

酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體CSMD1/FITC  熒光素標記抑癌基因CSMD1抗體IgG100 ul

酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體CTBP1/FITC  熒光素標記C端結(jié)合蛋白1抗體IgG100 ul

酸化活化復(fù)制因子2抗體CT DNA /FITC  熒光素標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG100 ul

酸化活化復(fù)制因子2抗體CT DNA /Gold  膠體金標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG(10nm/15nm)100 ul

酸化細胞周期末期促進復(fù)合蛋白APC1抗體CTGF/FITC  熒光素標記結(jié)締組織生長因子抗體IgG20 ul

發(fā)育分化增強因子1抗體CTLA-4/CD152 /FITC  熒光素標記淋巴細胞相關(guān)抗原4/細胞毒性T細胞抗原-4抗體IgG100 ul

酸化發(fā)育分化增強因子1抗體CTSC/PALS/DPP-I/FITC  熒光素標記組織蛋白酶C抗體IgG100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。