特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 綿羊皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Ovine Herpesvirus 1(OHV-2) | 貨號 | YSP97038 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 白介素1家族成員9(IL1F9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 短桿狀馬賽菌 1g 增殖關(guān)聯(lián)蛋白2G4(PA2G4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 博斯氏菌屬 250mg 類固醇5α還原酶1(SRD5α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 戊糖片球菌 5g 膜聯(lián)蛋白A4(ANXA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 短小芽胞桿菌 25g 角蛋白9(KRT9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 5g 多功能蛋白聚糖(VS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) Rh 25.3% 勒仔樹根瘤菌 1g 密封蛋白(OCLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) Rh 25.3% 微桿菌屬 250mg 分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) Rh 25.3% 米曲霉 500mg 運動因子相關(guān)蛋白1(MRP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% Chryseobacterium 1g 骨成型蛋白3(BMP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 油菜假單胞菌 250mg 非受體酪氨酸激酶2(TNK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 產(chǎn)朊假絲酵母 1g 封閉蛋白2(CLDN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 黑曲霉 5g 肌鈀蛋白(MYPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 弗蘭克氏菌 1g 血管非炎性蛋白1(VNN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 灰葡萄孢(灰霉病菌) 5g 鳥苷酸環(huán)化酶激活因子2A(GUCA2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 天麻蜜環(huán)菌(京-234)* 100g GM2神經(jīng)節(jié)苷脂激活因子(GM2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 假單胞菌屬 25g 溶酶體酸性酸酶2(ACP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥97% (HPLC) 樟疫霉 50mg 溶酶體酸性酸酶2(ACP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 1g 綿羊皰疹病毒1型探針法熒光PCR檢測試劑盒緊密連接蛋白17抗體Goat mouse IgM/Gold 金標(biāo)記羊抗IgM(10nm/15nm)100µl 緊密連接蛋白16抗體Goat rat IgG/Gold 金標(biāo)記羊抗IgG(10nm/15nm)100 ul CELF3蛋白抗體Goat Guinea pig IgG/Gold 金標(biāo)記羊抗豚鼠IgG (10nm/15nm)250µl 鈣粘蛋白超家族CELSR1抗體Goat rabbit IgG/Glod 金標(biāo)記羊抗兔IgG(10nm/15nm)100 ul 牙骨質(zhì)蛋白1抗體Mouse Goat IgG/Gold 金標(biāo)記鼠抗羊IgG(10nm/15nm)100 ul CENPBD1蛋白抗體Mouse Goat IgM/Gold 金標(biāo)記鼠抗羊IgM (10nm/15nm)54.05g 著絲粒蛋白I抗體Mouse human IgG/Gold 金標(biāo)記抗IgG (10nm/15nm)100 ul 著絲粒蛋白J抗體Mouse human IgM/Gold 金標(biāo)記抗IgM (10nm/15nm)100 ul 著絲粒蛋白L抗體Mouse rabbit IgG/Gold 金標(biāo)記抗兔IgG (10nm/15nm)1 mg |