樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 鯉皰疹病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cyprinid Herpesvirus(CyHV-II) | 貨號 | YSP96607 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 (S)-(+)-DBD-APy [=(S)-(+)-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))CDT1 Antibody化鈉 (R)-(-)-DBD-APy [=(R)-(-)-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAbN甲酰基胞嘧啶 (S)-(+)-NBD-APy [=(S)-(+)-硝基-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并惡二唑](>99.0%(LC))Cdc6 (C42F7) Rabbit mAb1-溴-3,4,5-*氧基 (R)-(-)-NBD-APy [=(R)-(-)-硝基-7-(氨基吡咯烷-1-基)-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC)) RRM1 Antibody2-氨基-4,5-二甲氧基甲酸甲酯 (S)-(-)-DBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-(N,N-二甲氨基磺?;?-7-(2-氯甲酰四氫吡咯-1-基)-2,1,并惡二唑](>90.0%(HPLC))LPP (8B3A11) Mouse mAbN,N-二甲基酰 (R)-(+)-DBD-Pro-COCl [=(R)-(+)-(N,N-二甲氨基磺?;?-7-(2-氯甲酰四氫吡咯-1-基)-2,1,并惡二唑](>95.0%(HPLC))Vimentin (5G3F10) Mouse mAb2-氨基-甲 (S)-(-)-NBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-硝基-7-(2-氯甲酰四氫吡咯-1-基)-2,1,并惡二唑]Phospho-c-Kit (Tyr719) AntibodyN-乙基-2-吡咯烷酮 (R)-(-)-DBD-Py-NCS [=(R)-(-)-(N,N-二甲氨基磺?;?-7-(異硫酸基四氫吡咯-1-基)-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))Phospho-c-Kit (Tyr719) Antibody羧基酸頻那酯 (S)-(+)-DBD-Py-NCS [=(S)-(+)-(N,N-二甲氨基磺?;?-7-(異硫酸基四氫吡咯-1-基)-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))Phospho-c-Kit (Tyr719) Antibody吡唑酸頻哪酯 (R)-(-)-NBD-Py-NCS [=(R)-(-)-(異硫酸基吡咯烷-1-基)-7-硝基-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))RYBP Antibody吡唑酸頻哪酯 (S)-(+)-NBD-Py-NCS [=(S)-(+)-(異硫酸基吡咯烷-1-基)-7-硝基-2,1,并惡二唑](>98.0%(HPLC))c-Kit Antibody8-溴-1-辛 Nα-(5-氟-2,二基)-L-氨酰(>95.0%(HPLC))JMJD2A (C70G6) Rabbit mAbbeta-氨酸芐酯對甲磺酸鹽 甲酰氯(>98.0%(GC)(T))SWAP70 (D5O6A) Rabbit mAb2-溴-5-甲氧 甲氧基甲酰氯(>98.0%(GC)(T))NHERF1 (A310) Antibody2-(2-氨乙基)吡啶 甲酰氯(>98.0%(GC)(T))Branched Ubiquitin Antibody Sampler Kit2,5-二氟酚 DAABD-Cl [=[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,并惡二唑LRP6 (C47E12) Rabbit mAb3,二氟酚 2,二肼(加約50%水濕潤,本品干重分別為約25g和500g)(>98.0%(HPLC)) LRP6 (C47E12) Rabbit mAb2-溴-氯甲 2,二氫-6-異硫酸基-1,酞二酮(>96.0%(HPLC))TCF8/ZEB1 (D80D3) Rabbit mAb吲唑 鯉皰疹病毒2型探針法熒光PCR檢測試劑盒甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒Raptor mTOR相關調(diào)控蛋白抗體100 ul 甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒Phospho-Raptor (Ser792) 酸化mTOR相關調(diào)控蛋白抗體100 ul 甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒RALDH2 視黃脫氫酶2型抗體100 ul 甲羥戊酸5-焦酸脫羧酶(MDD)ELISA試劑盒phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 酸化原癌基因c-Raf抗體20 ul 極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒phospho-c-Raf (Ser289) 酸化原癌基因c-Raf抗體100 ul 激肽原(KNG)ELISA試劑盒phospho-c-Raf (Ser259) 酸化原癌基因c-Raf抗體500 ul 激動異構酶/細胞分裂素MB(CKMB)ELISA試劑盒phospho-c-Raf (Ser296) 酸化原癌基因c-Raf抗體100 ul 基質(zhì)細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒phospho-c-Raf (Ser338) 酸化原癌基因c-Raf抗體300 ul 基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒RASGRF1 Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1100 ul |