PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
二雙[(氧羰基)基](>98.0%(GC))2,6-二氮雜螺[4.4]壬烷-2-羧酸叔丁酯

二雙(羧基)(>95.0%(T))1,7-二異喹啉

4,4'-亞基雙酚(>98.0%(GC))1,8-萘啶

4,4'-(2-基亞己基)二酚(>98.0%(HPLC))溴-1-異喹啉

9,9-雙[(2-羥氧基)基]芴(>98.0%(GC))5-溴-1-異喹啉

4,4'-(2-羥基亞甲基)雙(2,3,6-三酚)(>98.0%(HPLC))1--6-溴異喹啉

4,4'-（α-亞甲基）雙酚(>98.0%(GC))1--8-溴異喹啉

2-硝基對(duì)二甲(>95.0%(GC))N-(甲?；?2-吡啶基)-2,2-甲基酰

對(duì)二甲酰(>99.0%(GC)(T))2,6-二喹啉

2,3,5,6-四甲基-1,二(>98.0%(GC)(T))基-2,6-二羥基-三氟甲基吡啶

基聯(lián)(>98.0%(GC))2,3,4,5-四氟吡啶

2-基-4,6-二氨基-1,3,5-三(>95.0%(HPLC)(T))2,3,4 ,5-四吡啶

基甲酸(含穩(wěn)定劑BHT)(>97.0%(GC)(T))2,3,5,6-四氟吡啶

間二甲基二異酸酯(>98.0%(GC))2,3,5,6-四氨基吡啶

pre-ELM-11(>98.0%(T))二(聯(lián)基)

5-氨基間二甲酸水合物(>98.0%(T))酸三

2-氨基對(duì)二甲酸(>98.0%(HPLC)(T))三()

均四酸(>98.0%(T))(二甲基)甲
葡萄糖苷曼氏桿菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框140抗體NB3/CNTN6/FITC  熒光素標(biāo)記抗神經(jīng)細(xì)胞NB3特定蛋白抗體IgG20 ul

L型鈣通道蛋白抗體Contactin-6/mNB-3/FITC  熒光素標(biāo)記NB-3神經(jīng)粘附蛋白抗體IgG100 ul

電壓依賴(lài)性鈣通道Cav3.1抗體NBS1/FITC  熒光素標(biāo)記DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體IgG100 ul

緊密連接蛋白3抗體Phospho-p95/NBS1 (Ser343) /FITC  熒光素標(biāo)記酸化DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體IgG100 ul

酸化原癌基因c-Jun抗體N-cadherin /FITC  熒光素標(biāo)記N-鈣粘附分子抗體IgG100 ul

酸化原癌基因c-Jun抗體CD171/NCAM-L1/FITC  熒光素標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體IgG20 ul

1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框86抗體CD172a/SIRP Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α抗體IgG100 ul

8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框59抗體NCF/NCF4/p40phox/FITC  熒光素標(biāo)記嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體IgG100 ul

酸化補(bǔ)體成分5受體1抗體nck2/FITC  熒光素標(biāo)記NCK銜接因子蛋白2抗體IgG100 ul