PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 牙齦卟啉單胞菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Porphyromonas gingivalis | 貨號 | YSP97096 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! Engrailed同源框蛋白2(EN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98%,含0.1%碳酸鈣穩(wěn)定劑 近平滑假絲酵母 5g 膠質(zhì)細(xì)胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 白靈側(cè)耳(白靈菇) 25g 腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6(TNFαIP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 光滑鏈霉菌 5g 多聚A特異性核糖核酸酶(PARN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 土曲霉 100g 化物細(xì)胞內(nèi)通道蛋白1(CLIC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 球孢枝孢 25g 醌型二氫蝶啶還原酶(QDPR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 海濱適鹽菌 1g 肌酸轉(zhuǎn)運蛋白(CRT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 秦氏蜜環(huán)菌 250mg 蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶Ⅰα(MAT1α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 雙氧化酶2(DUOX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 斑污擬盤多孔孢 5g 雙氧化酶2(DUOX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 小孢根霉華變種 100g 組蛋白H1(H1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 枯草芽孢桿菌 25g 丙氨酸羥化酶(PAH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 96% 多主葡萄殼菌 500g 蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黑曲霉 1g γ-谷氨酰水解酶(γGH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 雜色曲霉 5g 胃泌酸調(diào)節(jié)素(OXM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99.9% metals basis 無 100g 硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99.9% metals basis 門多薩假單胞菌 25g 細(xì)胞色素P450家族成員2E1(CYP2E1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99.9% metals basis 鴨疫里氏桿菌 500g 衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 埃里鏈格孢 1g 牙齦卟啉單胞菌探針法熒光PCR檢測試劑盒3號染色體開放閱讀框24抗體Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原100 ul 補體C3b抗體phospha-Bcl-xL (pSer62) peptide (human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) 酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗原100 ul 補體C3b-α鏈抗體BCHE(butyrylcholinesrase)NT 丁酰膽脂酶抗原(N端)100 ul CD3抗體BCHE(butyrylcholinesrase)CT 丁酰膽脂酶抗原(C端)100 ul 著絲粒蛋白C1抗體Nurr1 核受體相關(guān)因子-1(抗原)1 ml 細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白CD73 (5´-nucleotidase cytosolic II ) 胞漿-5´-核苷酸酶-Ⅱ 抗原100 ul 豬瘟病毒抗體BECN1(Beclin1) 一種抑癌基因(多肽)100 ul 16號染色體開放閱讀框72抗體OGP (Osgenic Growth Peptide) 成骨生長肽 (骨生長激素肽)(蛋白多肽)100µl 補體C4 γ 鏈蛋白抗體OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)100 ul |