熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　95%　勒氏寡食單胞菌　5g

核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　蘋果交鏈孢　5g

骨髓基質(zhì)細胞抗原1(BST1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　阪崎腸桿菌　100g

Saitohin蛋白(STH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　枯草芽孢桿菌　25g

腺苷A2b受體(ADORA2b)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%　嗜熱脂肪地球芽胞桿菌　10g

鳥苷酸環(huán)化酶激活因子2B(GUCA2B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　95%　微小毛霉　1g

組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　≥98%　綠針假單胞菌　25g

饑餓素(GHRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　≥98%　斯氏假單胞菌　5g

生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　日本根霉　1g

SPARC樣蛋白1(SPARCL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　球形賴氨酸芽孢桿菌　250mg

防御素β112(DEFβ112)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　>98.0%(GC)　蠟?zāi)佟?g

血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　>98.0%(GC)　黑曲霉　25g

IgG-Fc片段低親和力受體Ⅲa(FcγR3A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　>98.0%(GC)　枯草芽孢桿菌　5g

信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　75%　擬黑馬朗假絲酵母　25ml

載脂蛋白C3(APOC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　95%　枯草芽孢桿菌　250mg

載脂蛋白C2(APOC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　97%　耶納農(nóng)球菌　50g

Janus激酶2(JAK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　99%　中慢生華癸根瘤菌　5g

旁血小板溶蛋白(PPL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)　98%,含0.1%碳酸鈣穩(wěn)定劑　黑曲霉　25g
豬細小病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒嗜酸粒細胞趨化蛋白24抗體NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1)  一氧化氮合成酶-1（抗原）100 ul

巨噬細胞炎性蛋白15NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible  一氧化氮合成酶-2（抗原）100 ul

巨噬細胞炎性蛋白抗體Batroxobin  蛇***毒***巴***曲***酶***抗***原20 ul

CD72蛋白抗體NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS  一氧化氮合成酶-3（抗原）100 ul

中心體蛋白128抗體NPY ( Neuropeptide Y)  神經(jīng)肽 Y（抗原）100 ul

著絲粒蛋白O抗體NR2B (Glutama receptor)  谷氨酸受體（抗原）20 ul

3號染色體開放閱讀框17抗體NT-3  神經(jīng)生長因子-3（抗原）100 ul

細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體NT-4,NT-5  神經(jīng)生長因子4/5（抗原）10 ug

酸化細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體NTN (Neurturin)  神經(jīng)生長因子（抗原）10 ug