產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱：革蜱PCR檢測試劑盒說明書
英文名稱：Dermacenter spp.PCR
編號：HE30885-R
類別:PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
?
儲需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
保存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
組蛋白H1（小牛胸腺）/Histones H1 from calf thymus 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g

粘蛋白/Mucin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g

胃粘膜素/粘液素II/粘液素III/胃膜素/Mucin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;250mg

蛋白保護(hù)劑TY/Protein protectant TY 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g

瓊脂糖蛋白A/Protein A–Agarose 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;100g

金屬硫蛋白/Metallothionein/MT 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 包裝;25g

肌紅蛋白/肌球素/肌血球素/Myoglobin from equine skeletal muscle 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g

瓊脂糖凝膠4B蛋白A/Protein A-Sepharose 4B, Fast Flow from Staphylococcus aureus 質(zhì)量規(guī)格：≥98%(T)，BR 包裝;100g

纖粘連蛋白/纖連蛋白(人血)/纖鏈蛋白/粘連蛋白/纖維結(jié)合素/血清纖維結(jié)合蛋白/CIG 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;25g

β-乳球蛋白/β-Lactoglobulin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g

Olig(dT)15 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;100g

PUC18/PUC18質(zhì)粒 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;25g

PUC19/PUC19質(zhì)粒 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g

結(jié)合珠蛋白/ Haptoglobin from pooled human plasma 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;25g

蛋白脫脂劑/Lipids-Remover from proteins 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g

氧合血紅蛋白/Oxyhemoglobin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;10mg

蛋白穩(wěn)定化試劑/Prionex 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g
革蜱PCR檢測試劑盒說明書Colletotrichum│orbiculare 中文名稱：瓜菌種屬:Colletotrichum│orbiculare提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃ 純度：98%

Cladosporium│cucumerinum 中文名稱：瓜枝孢（黃瓜黑星病菌）種屬:Cladosporium│cucumerinum提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃ 純度：AR,98.5％

Gibberella│zeae 中文名稱：玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）種屬:Gibberella│zeae提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃ 純度：10μg/ml,u=4%

Doratomyces│nanus 中文名稱：第九矛束霉種屬:Doratomyces│nanus提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃ 純度：96%

Pestalotiopsis│adusta 中文名稱：煙色擬盤多毛孢種屬:Pestalotiopsis│adusta提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:25℃ 純度：96%

Ulocladium│cucurbitae 中文名稱：南瓜細(xì)基格孢種屬:Ulocladium│cucurbitae提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:20℃ 純度：97%

Cercospora│amorphophalli 中文名稱：魔芋尾孢種屬:Cercospora│amorphophalli提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:28℃ 純度：97%

Pestalotiopsis│palmarum 中文名稱：掌狀擬盤多毛孢種屬:Pestalotiopsis│palmarum提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:14生長條件:28℃ 純度：≥99%
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。