樣品RNA的抽提: ①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測(cè) 1)紫外吸收法測(cè)定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測(cè)定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產(chǎn)品名稱 | 泰澤隱孢子蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Cryptosporidium tyzzeri | 貨號(hào) | YSP96602 |
實(shí)驗(yàn)過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè) 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分,并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 二甲偶氮紫Ic-Kit (Ab81) Mouse mAb氯-2-羥基甲 二甲基偶氮磺IIIc-Kit (Ab81) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)5-氨基煙酸 H-間二酚(>97.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody5-氨基-2-吡啶羧酸 偶氮磺III(>90.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) Antibody2-己基-1-癸 2-(磺基偶氮)-1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸三鈉鹽水合物(>95.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb氟-甲氧基 2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二甲氨基酚(>93.0%(HPLC))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb5-芐氧基吲哚-乙 (3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-1,二(>98.0%(T))Phospho-Cofilin (Ser3) (77G2) Rabbit mAb蒎 5-二基-2-(2-吡啶偶氮)酚(>98.0%(HPLC))JMJD1B (C69G2) Rabbit mAb基甲酸 2,2'-二羥基偶氮(>98.0%(T))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAbL(-)巖藻糖 芪偶氮Phospho-MAPKAPK-2 (Thr222) (9A7) Rabbit mAb(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜烷-2-基) 熒光鎵試劑(>98.0%(T))ZIP7/SLC39A7 (D1O3A) Rabbit mAb鹽酸強(qiáng)力霉素 浴酮靈二磺酸二鈉鹽Cofilin (D59) Antibody溴甲酸乙酯 水合紅菲繞啉二磺酸鈉水合物MARK1 Antibody2-甲基-6-乙基 浴銅靈 (升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Phospho-Ras-GRF1 (Ser916) Antibody富馬酸單乙酯 紅菲繞啉(升華提純)(>99.0%(HPLC)(T))Ras-GRF1 AntibodyGRUBB‘S第二代催化劑 浴銅靈(>98.0%(T))Axin1 (C7B12) Rabbit mAb甘氨酸芐酯鹽酸鹽 新亞銅試劑半水合物(>98.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr232) Antibody6-硝基-1-茚滿酮 紅菲咯啉(>99.0%(T))Phospho-Dab1 (Tyr220) Antibody甲基-1-茚酮 泰澤隱孢子蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA試劑盒PHD2 脯氨酸羥化酶2抗體100 ul 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白5(MIP-5)ELISA試劑盒PS-1 (NT) 早老素蛋白-1抗體20 ul 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒PS-1(CT) 早老素蛋白-1抗體100 ul 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒PS-1 早老素蛋白-1抗體300 ul 巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒PSA 前列腺特異性抗原單克隆抗體(包被)100 ul 巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒PSA 鼠抗前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測(cè))20 ul 巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒CPSA(mouse monoclonal) 復(fù)合前列腺特異性抗原單克隆抗體100µl 巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒PMSA/FOLH1 前列腺特異膜抗原抗體100 ul 巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒PSAP/PAP 前列腺酸性酸酶抗體100 ul |