產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:馬腺病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱:Equine Adenovirus(EAdV)PCR 編號(hào):HE30955-R 類別:PCR檢測試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲(chǔ)需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 1000ul盒裝無菌帶濾芯吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(N) 包裝;25g 10ul盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(N) 包裝;5g 200ul盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 包裝;100mg 1000ul盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 包裝;1g 10ul無菌盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 包裝;1g 200ul無菌盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC) 包裝;25g 1000ul無菌盒裝吸頭 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(T) 包裝;5g ø13mm系濾器/一次性針頭式過濾器 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(T) 包裝;100g ø25mm系濾器/一次性針頭式過濾器 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T) 包裝;25g ø13mm有機(jī)系濾器/一次性針頭式過濾器 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) 包裝;100ml ø25mm有機(jī)系濾器/一次性針頭式過濾器 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 包裝;500ml ø33mm系濾器/一次性針頭式過濾器 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(HPLC) 包裝;500mg 硅溶膠/硅酸溶膠/Silica solution 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC) 包裝;5MG 變色硅膠/Silicagel self indicator 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 包裝;1g 原色硅膠/Silicagel,original color 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC) 包裝;5g 硅膠/矽膠/硅凝膠/氧化硅膠/Silica gel 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC) 包裝;1g 硅膠G/薄層層析硅膠G/Silica gel G 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)(HPLC) 包裝;250mg 馬腺病毒PCR檢測試劑盒Mycoplasma│mycoides subsp capri 中文名稱:絲狀支原體山羊亞種種屬:Mycoplasma│mycoides subsp capri分離基物:山羊傳染性胸膜肺炎的肺組織提供形式:凍干物安全等級(jí):4模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:滅活疫苗培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:57生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:≥98% Clostridium│novyi 中文名稱:諾維氏梭菌種屬:Clostridium│novyi分離基物:黑疫綿羊肝提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于科研及血清定型培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:52生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:≥98% Mycobacterium│bovis 中文名稱:牛分枝桿菌種屬:Mycobacterium│bovis分離基物:結(jié)核病奶牛提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:科研及血清定型培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:61生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:99% Mycobacterium│intracellulare 中文名稱:胞內(nèi)分枝桿菌種屬:Mycobacterium│intracellulare分離基物:病料提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:鳥-胞內(nèi)分枝桿菌分離株血清定型培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:61生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:99% Mycobacterium│paratuberculosis 中文名稱:副結(jié)核分枝桿菌種屬:Mycobacterium│paratuberculosis分離基物:副結(jié)核病牛糞便提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:科研及血清定型培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:182生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:99% Mycoplasma│ovipneumoniae 中文名稱:綿羊肺炎支原體種屬:Mycoplasma│ovipneumoniae分離基物:肺炎綿羊組織提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:分離株血清定型培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:400生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:99% Trypanosoma│equiperdum 中文名稱:馬媾疫錐蟲種屬:Trypanosoma│equiperdum分離基物:病馬和尿道粘膜提供形式:其他安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:可用于抗原和陽性血清,藥物篩選試驗(yàn)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:0生長條件:37存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法; 純度:99% Aviadenovirus│Avian adenovirus 7 中文名稱:禽腺病毒(7型)種屬:Aviadenovirus│Avian adenovirus 7分離基物:病料提供形式:凍干物安全等級(jí):2模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:血清型參考毒株培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:0生長條件:37存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法; 純度:98% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |