熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 腺病毒F型探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Adenovirus(AV) | 貨號 | YSP96351 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 非洛地平(標準品)C14H12N2O2beta-環(huán)糊精水合物 6-硫鳥嘌呤(進分)C7H6O2甲睪酮 6-硫鳥嘌呤C7H14O62-芐氧基溴乙烷 6-硫鳥嘌呤(標準品)C18H24O亞硫酸亞乙酯 維A酸;全反式維A酸;維生素A酸;視黃酸C30H48O22-氯甲基-甲基-(甲氧氧基)吡啶鹽酸鹽 維A酸;(標準品)C30H46O2溴-甲基三氟甲苯 卡莫司汀/卡氮芥C30H44O3戊基雙環(huán)己烷甲酸 卡莫司汀/卡氮芥(標準品)C8H10O3左旋苯甘氨酸酰胺 卡莫司汀/卡氮芥(進分)C17H16O65-氯-2-三氟甲氧基苯胺 比卡魯胺C30H48O33,5-二叔丁基-羥基苯甲酸正十六酯 比卡魯胺(標準品)C6H6O21,二甲基喹啉酮 白消安C4H6O42-氯-5-氟甲苯 白消安(標準品)C4H4O42-甲基-吡啶酸 洛莫司汀C43H49NO184,4,三氟巴豆酸乙酯 洛莫司?。藴势罚〤30H50鄰苯二甲酰亞氨基環(huán)己酮 羥基脲C10H18O4二(*氧硅烷基基)胺 羥基脲(標準品)C26H34O9二叔丁基硅基雙(三氟磺酸) 枸櫞酸托瑞米芬C30H46O35-氯-2-硝基三氟甲苯 腺病毒F型探針法熒光PCR檢測試劑盒D2(PGD2)ELISA試劑盒Phospho-ATP1A1 ( Ser16) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體100 ul 前列環(huán)素(PGI2)ELISA試劑盒Phospho-ATP1A1(Ser23) 磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體100 ul 前白蛋白(PA)ELISA試劑盒ATXN1 失調(diào)癥蛋白1抗體100 ul 葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒phospho-ATP citralyase(Ser455) 磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體100 ul 葡萄糖激酶(GCK)ELISA試劑盒phospho-Ataxin-1(Ser775) 磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體300 ul 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)ELISA試劑盒AVEN 凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑抗體100 ul 葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒Kir6.2 ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體5 mg 破傷風(Tetanus)抗體ELISA試劑盒AVPR2 精氨酸加壓素受體2抗體1 vial 破骨細胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒Bdkrb2/B2R 緩激肽B2受體抗體100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |