熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 海豚鏈球菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus iniae | 貨號(hào) | YSP97226 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 冰凍切片衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYPLAL1 ELISA Kit 100 ul 通用型組織/細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 LYRM7 ELISA Kit 100 ul 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒 LYPLA1 ELISA Kit 100 ul 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 LUC7L ELISA Kit 10 Pack 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 LUC7L2 ELISA Kit 100 ul 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒 LSM8 ELISA Kit 500 ul 動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 LSM5 ELISA Kit 500 ul 動(dòng)物組織β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 LSP1 ELISA Kit 100 ml 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒 LSM7 ELISA Kit 100 ul 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 LSR ELISA Kit 1 Kit 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒 LUC7L2 ELISA Kit 100 ul 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒(帶濾膜) LUC7L ELISA Kit 2.5 ml 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒 LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit 100 ul 動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒 LUZP1 ELISA Kit 20 ul 動(dòng)物組織β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測(cè)試劑盒 LXN ELISA Kit 100 ul 動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性超敏熒光定量檢測(cè)試劑盒 LY6D ELISA Kit 100 ul 海豚鏈球菌探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒叉頭蛋白H1抗體mmp-2(Human) 基質(zhì)金屬蛋白酶-2()20 ul 叉頭蛋白I1抗體ILK-1(Human) 整合素連接激酶1100 ul 酸化叉頭蛋白4抗體Human complement factor H,CFH 自身免疫類ELISA試劑盒20 ul 單跨膜蛋白FOXRED1抗體G-CSF 粒細(xì)胞-集落刺激因子100 ul FOXRED2蛋白抗體NO(Nitric Oxide )human 一氧化氮()100 ul 巖藻糖1酸鳥苷酰轉(zhuǎn)移酶抗體GM-CSF 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子100 ul 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FREM1抗體M-CSF 巨噬細(xì)胞-集落刺激因子20 ul 原癌基因FRAT1抗體LIF 白血病抑制因子100 ul 叉頭蛋白D1抗體Lysozyme(human) 溶菌酶()20 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |