特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。
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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實(shí)驗(yàn)時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強(qiáng)度信號，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
硫酸鎳六水GFAP (D1F4Q) XP® Rabbit mAb2-吡啶甲酰肼

乙酸銨(分子生物學(xué)級)GFAP (D1F4Q) XP® Rabbit mAb2-羥基-5-乙酮

微晶纖維素(100 um)YAP (1A12) Mouse mAb5-溴-2-羥基乙酮

糖；α-糖,一水BNIP3L/Nix (D4R4B) Rabbit mAbBOC-L-焦谷氨酸乙酯

氯化鈣二水Phospho-DNAJC2/MPP11 (Ser47) Antibody2-溴-5-氯甲

乙二Malic Enzyme 2 Antibody2-溴-3,5-二氯吡啶

硫酸鎂七水(分子生物學(xué)級)PI3 Kinase Class II α (D3Q5B) Rabbit mAb1,二氫異并呋喃

糖化酶;葡萄糖淀粉酶SignalSilence® FLIP siRNA II2,4,5-三氟甲

乙酰Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)3,二氟甲酸乙酯

聚乙二4000SOS1 (D3T7T) Rabbit mAb1-BOC-氨甲基哌啶

無水酸氫二p44/42 MAPK (Erk1/2) Blocking Peptide (#4695 Specific)2-溴-6-氟吡啶

甲酰SignalSilence® p27 Kip1 siRNA II2,6-二氟-

聚乙二8000Immunofluorescence Blocking Buffer去甲托品鹽酸鹽

氯化鋰(分子生物學(xué)級)PAX3 Antibody2,二氟氯

硫酸亞鐵銨六水α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)溴-羥基甲酸

紅四氮唑SignalSilence® UCHL1 siRNA II氨基

磺甲氧噠CARD9 Antibody氯代肟基乙酸乙酯

磺甲氧噠(標(biāo)準(zhǔn)品)CK1δ AntibodyL-(+)-環(huán)己基甘氨酸
巴爾通體通用探針法熒光PCR檢測試劑盒豚鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒E2 tag  E2 tag標(biāo)簽抗體100 ul

豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒HPV16 E7 proin  頭瘤病毒16型E7抗體20 ul

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒EAAT1/Glast  膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白1抗體300 ul

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒EAAT2  膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白2抗體100 ul

豚鼠黃體激素(LH)ELISA試劑盒EAAT3  膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白3抗體100 ul

豚鼠環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒EBNA 3A  EB病毒核抗原-3A抗體100 ul

豚鼠環(huán)酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒ECE1  內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體100 ul

豚鼠過氧化脂質(zhì)/過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒ECE2  內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗體300 ul

豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)ELISA試劑盒ECG2  食道癌相關(guān)基因抗體100 ul