特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 新生隱球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Cryptococcus neoformans | 貨號 | YSP96597 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>95.0%(T))Caveolin-1 Antibody2,二甲基-吡咯羧酸乙酯 16-DOXYL-硬脂酸自由基(>95.0%(HPLC)(T))Gab2 (26B6) Rabbit mAb3,5-二甲基-2-吡咯甲 羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))Gab2 (26B6) Rabbit mAb甲磺酸伊馬替尼 羥基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基甲酸鹽自由基(>97.0%(GC))α-E-Canin (23B2) Rabbit mAb3,4,5-三氟溴芐 異硫酰基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))α-E-Canin (23B2) Rabbit mAb羥基-三氟甲 (2-代乙酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>98.0%(HPLC))Phospho-PAK4 (Ser474)/PAK5 (Ser602)/PAK6 (Ser560) Antibody肉桂酰 甲氧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC)(T))PAK4 Antibody吲哚-酸 甲基酰氧-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧自由基(>98.0%(GC)(T))LAMP1 (C54H11) Rabbit mAb2-乙?;?/span> 氧代-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>95.0%(GC)(T))Flotillin-2 (L294) AntibodyFMOC-D-(噻吩基)-氨酸 2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>98.0%(GC)(T))Profilin-1 (C56B8) Rabbit mAb5-氟-2-甲 氧代[5,10,15,20-四(吡啶基)卟吩]合鈦(IV)(>90.0%(HPLC))Profilin-1 (C56B8) Rabbit mAb1-芐基-哌啶甲 CLA (>98.0%(HPLC))Pim-1 (C93F2) Rabbit mAbL-薄荷 MCLA (>98.0%(HPLC))Pim-1 (C93F2) Rabbit mAb1,2,3,四氫-1-萘 FCLA 自由酸[化學發(fā)光試劑]PKG-1 (C8A4) Rabbit mAb5-溴二氫吲哚 紅-CLA(含氮量:9.00-10.30 %)Mic-1 (Y60) Antibody5-二并環(huán)庚酮 異魯米諾(>98.0%(HPLC)(T))HER2/ErbB2 (M45) Antibody2-氨基-甲酸甲酯 雙(N-甲基吖啶)硝酸鹽(>97.0%(HPLC))TBR1 (D6C6X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)1,3,5-*?;?D-呋喃核糖 雙(2,4,6-三)草酸酯(>98.0%(T))Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) Antibody乙氧基酸 新生隱球菌探針法熒光PCR檢測試劑盒可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒PP2Ac 酸酯酶-2Ac抗體100 ul 可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒PPAR-delta/beta D型-過氧化酶活化增生受體抗體100 ul 可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒PPAR alpha α型-過氧化酶活化增生受體抗體100 ul 可溶性CD80(sCD80)ELISA試劑盒PPAR Gamma 過氧化酶活化增生受體γ抗體100 ul 可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒Phospho-PPAR Gamma (ser112) 酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體100 ul 可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒PPIG 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體100 ul 可溶性CD23(sCD23)ELISA試劑盒Phospho-PPIG (Ser376) 酸化親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體100 ul 可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒PKB/Akt1 蛋白激酶B100 ul 顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒phospho-AKT/PKB (Ser473) 酸化蛋白激酶B抗體1 Kit |