樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產品名稱 | 犬皰疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Canine Herpes Virus | 貨號 | YSP96510 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 溴菊酯標準溶液(100μg/ml,基體:石油)F4/80 (BM8.1) Rat mAb (APC-Cy7® Conjuga)2-氯-5-基酸 草萘(標準品)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAbCHLORO-5-BUTOXYPHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR 除蟲脲標準溶液(100μg/ml,u=2%,基體:酮)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb2,二氯-1- 除蟲脲標準溶液(10μg/ml,u=3%)ST14/Matriptase Antibody環(huán)己基-D-氨酸水合物 2,滴酸(標準品)BST2 (D5V5Z) Rabbit mAb基二硫 2,滴酸(98%)Arginase-2 Antibody甲基吲哚-2-甲 二噻農(標準品)PCSK7 (D4I5G) Rabbit mAb2,5-二(基)-1,3,惡二唑 棉隆(標準品)HELQ (D4K2O) Rabbit mAb2-氟-6-(三氟甲基) 雙氯酚(標準品)Di-Methyl-RPL29 (Lys5) (D8T9P) Rabbit mAb甲基酰氧基基三乙氧基硅烷 異凈(標準品)Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (E7M1H) XP® Rabbit mAbNα-(叔丁氧羰基)-L-色氨酸 N-琥珀酰亞酯 異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%)Cas9 (<i>S. pyogenes</i>) (E7M1H) XP® Rabbit mAb氯-2,6-二氟酸 異氯(標準品)Glucocorticoid Receptor (D8H2) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-RT-BUTYL-(NITROPHENYL)-1,2,OXADIAZOLE 1,二氯-d4(標準品)MEKK2 Antibody(CHLORO-METHYLPHENYL)-1H-1,2,TRIAZOL-5(4H)-ONE 2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-聯(lián)(標準品)Androgen Receptor (AR-V7 Specific) (E3O8L) Rabbit mAb4,4'-亞甲基雙(2,6-二甲基)酚 二環(huán)戊二環(huán)氧化物(97%)Cystathionine γ-Lyase (D1N1D) Rabbit mAb鄰芐基 1,2-二氯乙烷(standard for GC,>99.9%(GC))CD16A (D8W2O) Rabbit mAb吡啶 1,2-二氯乙烷(for HPLC,≥99.9%)Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2,二氟-6-酚 1,2-二氯乙烷標準熔液(1.00mg/ml,基體:甲)Phospho-STING (Ser366) (D7C3S) Rabbit mAb雙(2,4,6-三)草酸酯 犬皰疹病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒白介素3(IL-3)ELISA試劑盒IRF7 干擾素調節(jié)因子7抗體100 ul 白介素2誘導的T細胞激酶(ITK)ELISA試劑盒Phospho-IRF7 (Ser471/472) 酸化干擾素調節(jié)因子7抗體100 ul 白介素2受體(IL2R)ELISA試劑盒IRS P53 胰島素受體底物p53蛋白抗體100 ul 白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒IRS1 胰島素受體底物-1抗體20 ul 白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser307) 酸化胰島素受體底物-1抗體100 ul 白介素29(IL-29)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser1101) 酸化胰島素受體底物-1抗體250 ml 白介素28B(IL-28B)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser302) 酸化胰島素受體底物-1抗體25 ml 白介素28A(IL-28A/IFN-λ2)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser332/336) 酸化胰島素受體底物-1抗體5 mg 白介素26(IL-26)ELISA試劑盒phospho-IRS1(Ser612) 酸化胰島素受體底物-1抗體5 mg |