特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 鵝裂口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Amidostomum anseri | 貨號 | YSP96368 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 納他霉素(標準品)C12H14O55-溴-2-羥基苯甲 硝苯地平C9H7ClO2氟間苯二 硝苯地平(標準品)C23H24O6(S)-N-縮水甘油鄰苯二甲酰亞胺 尼莫地平C22H24O11反式-2,二氯苯乙烯酸 尼莫地平(標準品)C16H14O42-溴-5-甲氧基吡啶 硝唑尼特C10H10O31, 環(huán)庚二酮 硝唑尼特(標準品)C10H10O32-氨基-5-羥基吡啶 寡霉素AC9H8O3氟比洛芬 鹽酸奧洛他定C11H12O42-氟-苯 鹽酸奧洛他定(標準品)C11H10O2溴五 鹽酸奧昔布寧C16H14O2(溴甲基)苯甲 鹽酸奧昔布寧(標準品)C18H26O31,2,苯*酸三烯酯 鹽酸帕羅西汀C10H10O21,二氯異喹啉 鹽酸帕羅西汀(標準品)C11H12O2甲氧基乙酸乙酯 吡羅昔康C17H21NO42,二甲基-5-胺 吡羅昔康(標準品)C21H18O114,6-二氨基-2-巰基嘧啶 泊沙康唑C33H34O7磺?;前?/span> 泊沙康唑(標準品)C22H18O102,二氟-氯苯胺 鵝裂口線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒Caspase-9 白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體100 ul 巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA試劑盒Phospho-Caspase-9 (Thr125) 磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體100 ug 巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒Phospho-Caspase-9 (Try153) 磷酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體300 ul 巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒Caveolin-1 細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體50 ml 巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) 磷酸化細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體100 ul 巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒Caveolin-3 細胞質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體100 ul 金屬硫蛋白2(MT-2)ELISA試劑盒Alpha-Catenin α-連環(huán)蛋白抗體300 ul 金屬硫蛋白1(MT-1)ELISA試劑盒Beta catenin β-連環(huán)蛋白抗體(β鏈接素)100 ul 解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒phospho-Beta-catenin(Tyr142) 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體100 ul |