PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 寄生曲霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Aspergillus parasiticus | 貨號 | YSP96391 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團,3'端標(biāo)記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 鹽酸頭孢吡肟 C6H12O5過氧化單硫酸鹽 鹽酸頭孢吡肟 (標(biāo)準(zhǔn)品)C7H6O3C. I. 顏料紅 49 洛索洛芬鈉C10H16KNO9S26-甲基咪唑[2,1-B]噻唑-5-羧酸乙酯 洛索洛芬鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)C45H74O吡啶硫酮銅 丹皮酚C48H78O18馬來酸氯那敏 丹皮酚(標(biāo)準(zhǔn)品)C15H20N2O溴-2-氟三氟甲 羅通定/左旋延胡索乙素/左旋四氫巴馬汀C23H24ClN3O52-氨基-氯吡 利拉萘酯C8H8O3溴-1,3,4,5-四氫-2H-1-并氮雜卓-2-酮 利拉萘酯(標(biāo)準(zhǔn)品)C22H26N2O29,10-二氫-9-氧雜-10-雜菲-10-氧化物 萘普生鈉C27H45NO2甲基乙基二甲氧基硅烷 萘普生鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)C7H8ON-已?;胚?甲 齊多夫定C24H40O43,二氟氯 齊多夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)C48H78O19二硫 尼可地爾C20H22O6甲氧基茴香硫 尼可地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)C15H24O5(氯甲酰)酸 煙酸C18H19NO52-氯-硝 利福平;利發(fā)霉素C10H18O2-甲氧基-硝基-甲基吡啶 利福平(標(biāo)準(zhǔn)品)C10H14O2-溴-9,9'-螺二芴 寄生曲霉探針法熒光PCR檢測試劑盒穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒CD329/SIGLEC9 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素9抗體1 Kit 程序性死亡1(PD-1)ELISA試劑盒KLRF1/NKp80 細胞毒性受體NK-p80抗體100 ul 成纖維細胞生長因子9(FGF9)ELISA試劑盒SIGLEC10/SLG2 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素抗體100 ul 成纖維細胞生長因子8(FGF8)ELISA試劑盒Cdc6 細胞分裂周期蛋白6抗體100 ug 成纖維細胞生長因子6(FGF6)ELISA試劑盒CD339/Jagged1 Jagged1/CD339抗體20 ml 成纖維細胞生長因子4(FGF4)ELISA試劑盒Sialic14 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體100 ml 成纖維細胞生長因子13(FGF-13)ELISA試劑盒SIGLEC11 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素11抗體1 mg 成纖維細胞生長因子10(FGF10)ELISA試劑盒Cdc34/UBC3 細胞周期調(diào)控因子34100 ul 成神經(jīng)細胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因同源物ELISA試劑盒CDC42 細胞分化周期CDC42蛋白抗體100 ul |