樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 產品名稱 | 微黃*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nematodirus helvetianus | 貨號 | YSP97000 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 AIP1 英文名稱: 激活素受體相互作用蛋白1抗體 0.2ml Anti-CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 熒光素標記NK細胞抑制性受體2DL3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit 小鼠粘蛋白/粘液素7Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-BRCA1(mouse rat)/FITC 熒光素標記癌易感基因1抗體(小鼠 大鼠)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2mlKit進口/分裝 人γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒英文名稱:Human interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit* 人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒英文名稱:Humanγ-glutamyl systeine synthetase,γ-ECS ELISA Kit* 人γ谷氨酰轉移酶(G) ELISA試劑盒英文名稱:Human gamma glutamyl transpeptidase,GG ELISA Kit進口/原裝 人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒英文 X-114室溫保存100mL 曲拉通 X-100Triton X-100室溫保存100mL 隱丹參酮Cryptotanshinone35825-57-120mgHPLC≥98% 隱綠原酸;4-咖啡??鼘幩酑ryptochlorogenic acid905-99-720mgHPLC≥98% 印烏堿Indiaconitine20mgHPLC≥98% 櫻黃素;李屬異黃酮;李屬異黃酮;5,4'-二羥基-7-甲氧基異黃酮Prunetin552-59-020mgHPLC≥98% 鷹嘴豆芽素A;雞豆黃素A,生原禪寧A,5,7-二羥基-4’-甲氧基異黃酮;拜查林Biochanin A491-80-520mgHPLC≥98% 硬飛燕草堿Belsoline509-18-220mgHPLC≥98% 右旋四氫巴馬汀d-Tetrahydropalmatine3520-14-? Rhesus antibody Rh EphA5/Eph receptor A5 酪氨酸蛋白激酶A5受體抗體 規(guī)格 0.1ml Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit 小鼠Qa淋巴細胞抗原2 96T MRG15 英文名稱: 轉錄調控因子MRG15抗體 0.2ml C17orf66 英文名稱: 17號染色體開放閱讀框66抗體 0.2ml Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型蛋白1)人Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit 人抗巨細胞病毒抗體IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-PP2Ac 酸酯酶-2Ac抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Hepatic lipase 肝脂酶抗體 規(guī)格 0.2ml P III NP(Human N-terminal procollagen III propeptide) ELISA Kit 人Ⅲ型前膠原肽 96T PCDH7 英文名稱: 原鈣粘蛋白7抗體 0.2ml 脂酰肌醇3激酶P85α 單克隆抗體PI3 Kinase P85α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖調節(jié)蛋白78 單克隆抗體GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信號傳導蛋白SMAD3 單克隆抗體Smad3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信號轉導因子和轉錄激活因子3 單克隆抗體STAT3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 葡萄糖調節(jié)蛋白78 單克隆抗體GRP78/Bip Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 核酮糖-1,5-二酸羧化酶/加氧酶 (Large Chain) 單克隆抗體Rubisco (Large Chain) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 微黃*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒卷曲螺旋結構域蛋白134抗體Tubulin- Gamma/FITC 熒光素標記微管蛋白-γ抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結構域蛋白69抗體 Beta-Actin/HRP 辣根過氧化物酶標記β-肌動蛋白(抗體)1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白98抗體Tuberin/TSC2/FITC 熒光素標記馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白70抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr320) /FITC 熒光素標記酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白51抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 熒光素標記酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白125抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) /FITC 熒光素標記酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結構域蛋白50抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)/FITC 熒光素標記酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白90A抗體Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462)/FITC 熒光素標記酸化馬鈴薯球蛋白(結節(jié)性硬化)抗體IgG1 Kit 卷曲螺旋結構域蛋白71抗體VTG/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體IgG100 ul |